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              凈化

              品系凈化是指,通過特定處理,消除病毒、細菌和寄生蟲,得到SPF級別動物的服務。維通達通過胚胎清洗和胚胎移植的方式,獲得SPF級別的動物;同時委托第三方提供相關微生物檢測服務,出具相關檢測合格報告。


              1.服務類別

              凈化服務,根據飼養環境不同分為兩類:IVC凈化和隔離器凈化。根據凈化級別,使用的代孕鼠和凈化方案、設施均不同。常用的凈化標準包括:(1)VAF/PLUS?;(2)GB-SPF;(3)VAF/ELITE?;(4)定制標準。

              根據基因型不同,可以分為純合凈化或者雜合凈化。純合凈化需要準備一定數量,基因型均為純合的雌鼠和雄鼠;雜合凈化只需要提供基因型符合需要的2~3只可育雄鼠即可。


              2.服務簡介

              胚胎凈化的目的是獲得無特定病原體(Specific pathogen Free, SPF)動物,即體內無特定的微生物和寄生蟲存在的動物。常用的方法包括剖腹產和胚胎移植,但由于剖腹產不能消除垂直傳播的病毒(如鼠巨細胞病毒MCMV;淋巴細胞性腦膜炎病毒LCMV和腦胞內原蟲ECUN),且對于手術設施依賴程度較大,目前通過胚胎移植的方法,消除病毒、細菌和寄生蟲,是易行的品系凈化方法。


              胚胎凈化的原理,是發育早期游離狀態的胚胎有透明帶,可以防止細菌、寄生蟲和大部分病毒的侵襲;通過無限稀釋的方法將透明帶外面的微生物含量降至極低的水平,移植到代孕的健康小鼠體內后,小鼠的免疫系統會清除掉這些微生物,而達到凈化的目的。國際胚胎移植協會推薦的標準,是在特定的培養液微滴中進行10次清洗,每次大約100倍的稀釋。即便如此,仍有凈化失敗的風險,例如,鼠的細小病毒(MMV),有研究發現其可以通過透明帶進入胚胎內部;有時采用的胚胎是通過體外受精(IVF),或透明帶受到破壞的胚胎(如冷凍、解凍),這些情況需要采用不同的策略。研究發現,通過胚胎移植進行凈化,胚胎的獲取方法(雌鼠和雄鼠的準備)和胚胎處理(洗滌和培養)策略,會影響胚胎凈化的結果[1~4]。胚胎獲取的方法中,采用雄鼠(攜帶病原體)與同品系雌鼠(SPF)交配的方法獲得胚胎,后代凈化污染病原的風險很低;可以不需要對胚胎進行微生物分析,即雜合凈化[2]。胚胎處理常用的方法是多次洗滌和一定時間的培養[1,3]。若胚胎是通過IVF,或透明帶受到破壞的胚胎(如冷凍、解凍),需要對胚胎培養液進行分析,以確認是否有病原微生物的污染,這些凈化后代需要每窩分別檢測[4]。


              為了確保凈化成功,需要對凈化的流程進行標準化控制(見圖示)。①凈化前,對凈化品系的病原感染情況進行評估,如對清洗胚胎的溶液進行Q-PCR分析,確認病毒含量;②凈化時,凈化品系與SPF野生雌鼠交配獲取胚胎,降低病毒通過透明帶進入胚胎的概率;③凈化后,對哨兵鼠或凈化大小鼠進行微生物檢測確認病原是否凈化掉。由于從微生物感染到檢測出來有一定的潛伏期,因而應根據具體的情況制定相應的策略。


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              常用的凈化標準有GB-SPF、FELASA、VAF/PLUS?和VAF/ELITE?等。檢測的微生物項目越多,產生的檢測費用也會越多。但是對于特定研究而言,也不是檢測的項目越多越好,應根據實際的實驗要求選擇相應的標準。一般選擇的原則是:免疫缺陷動物需要采用隔離器凈化(排除環境菌);非免疫缺陷動物采用IVC凈化即可(一般不需要排除環境菌)。IVC凈化的代孕母鼠來自于屏障設施,隔離器凈化代孕母鼠來自于隔離器,后者購鼠費用和飼養費用較高,特別是對于特殊品系,1個品系就需要使用1個隔離器3~4個月時間。我們可根據客戶需求增加檢測項目,費用根據檢測項目增減。

              通常情況下獲得符合健康標準的動物模型,就可以排除微生物的干擾,進行擴繁或開始正式的實驗。


              參考文獻:

              [1] Risks of transmissible diseases in relation to embryo transfer. Reprod. Nutr. Dev. 41 (2001) 439–450

              [2] Embryo Transfer Rederivation of C.B-17/Icr-Prkdcscid Mice Experimentally Infected with Mouse Parvovirus 1. Comparative Medicine. Vol 58, No 4 August 2008 Pages 353–359

              [3] Rederivation by Embryo Transfer in Strains of Laboratory Mice and Rats. Russian Journal of Genetics: Applied Research. 2013, Vol. 3, No. 4, pp. 305–315

              [4] www.jax.org/jaxmice/health Aligning Health Surveillance and Risk in Embryo Transfer, Embryo wash testing.

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